Microscopie electronique

La plateforme de Microscopie Électronique en Transmission de l’IMM a pour objectif de répondre aux besoins des études morphologiques nécessitant la localisation ultrastructurale précise d’éléments cellulaires, subcellulaires et moléculaires.

Elle offre des outils techniques, méthodologiques et informatiques de la technologie qui accompagnent l’utilisation d’un microscope électronique en transmission.

La plateforme de Microscopie Électronique en Transmission propose différentes techniques de préparation déterminées à la fois par la problématique et les contraintes de l’échantillon à étudier. Elle sont de 2 types :

Préparation des échantillons par techniques conventionnelles : fixation chimique, déshydratation, inclusion en résine époxy

Préparation des échantillons par des techniques de cryopréparation :

Cryofixation
Cryosubstitution
Cryo-ultramicrotomie
Technique de « Tokuyasu » (cryocoupes + immunomarquages)

Préparation de grilles membranées (Formvar / Carbon coating)

Réalisation de coupes, à température ambiante, d’échantillons inclus en résine :
Semi-fines (de 500nm à 2µm) pour analyse histologique au microscope photonique
Ultra-fines (70nm) pour analyse ultrastructurale au microscope électronique

Immunomarquage en pré-embedding ou en post-embedding

Contraste positif des coupes ultra-fines (acétate d’uranyle et réactif de Reynolds)
Coloration négative (acétate d’uranyle, molybdate d’ammonium, acide phosphotungstique)

Suite à leur préparation, l’analyse des échantillons se fait ensuite par microscopie électronique en transmission, à température ambiante ou à froid.

Nous proposons aussi la technique de Tomographie en température ambiante ou a froid ainsi que la technique des particules isolés (single particle analysis).

En parallèle, le personnel de la plateforme assure la formation des utilisateurs à ces différentes techniques.